MANJE. Chudinov, V.A. Platonov, A.V. Alexandrova, S.N. Elansky
Li te dènyèman te montre ke ascomycete chanpiyon Ilyonectria crassa a kapab enfekte tubèrkul pòmdetè. Travay sa a se premye moun ki analize karakteristik byolojik yo ak rezistans nan kèk fonjisid nan souch I. crassa izole nan pòmdetè. Sekans yo nan rejyon espès-espesifik nan souch la "pòmdetè" kowenside ak sa yo jwenn pi bonè pou fongis izole nan rasin yo nan jonkiy, jinsang, Aspen ak Beech, anpoul yon bèl ti flè ak fèy Tulip. Aparamman, anpil plant sovaj ak jaden ka rezèv nan I. crassa. Souch envestige a enfekte tomat ak tranch pòmdetè, men li pa t enfekte fwi tomat antye ak tubèrkul pòmdetè entak. Sa montre ke I. crassa se yon parazit blese. Evalyasyon rezistans nan fludioxonil, difenokonazòl ak azoksistrobin sou yon mwayen eleman nitritif te montre efikasite segondè nan dwòg sa yo.
Endikatè EC50 la (konsantrasyon fonjisid la, ki ralanti pa 2 fwa to kwasans radial koloni an parapò ak kontwòl fonjisid la gratis) te egal a 0.4; 7.4 ak 4 mg / l, respektivman. Posibilite pou devlopman nan maladi a ki te koze pa I. crassa ta dwe pran an kont lè evalyasyon fitopatolojik nan tubèrkul pòmdetè ak devlopman nan mezi pwoteksyon plant yo.
Devlopman nan mikwo-òganis fitopatojenik mennen nan pèt segondè nan tout etap nan ap grandi ak estoke pòmdetè. Lè w ap planifye mezi pwoteksyon, tankou yon règ, patojèn ki byen koni yo pran an kont, tankou espès jenerasyon Alternaria, Fusarium, Phoma, Helminthosporium, Colletotrichum, Phytophthora, elatriye Sepandan, nan dènye ane yo, pi plis ak plis rapò yo te parèt sou aparans nan mikwo-òganis fitopatojenik nouvo sou pòmdetè. Biyoloji yo mal etidye, efikasite nan fonjisid yo itilize sou pòmdetè an relasyon ak yo se enkoni, metòd dyagnostik pa te devlope. Avèk devlopman masiv, yo kapab lakòz gwo domaj nan rekòt la pòmdetè. Youn nan mikwo-òganis sa yo se chanpiyon ascomycete Ilyonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous, premye dekouvèt pa otè yo sou tubèrkul pòmdetè (Chudinova et al., 2019).
Travay sa prezante rezilta analiz souch I. crassa izole nan tubèrkul pòmdetè yo. Yo te etidye mòfoloji koloni ak estrikti miselyal I. crassa, sekans nukleotid nan rejyon ADN espès-espesifik, virulans nan pòmdetè ak tomat, ak rezistans nan kèk fonjisid popilè.
Materyèl ak metòd
Nou te itilize I. crassa 18KSuPT2 souch la izole nan 2018 soti nan tubèrkul la pòmdetè enfekte grandi nan rejyon an Kostroma. Tubèrkul la te afekte pa yon kalite pouri sèk ak yon kavite ki kouvri ak limyè miselyom mawon. Sèvi ak yon zegwi disil esteril, miselyom chanpiyon an te transfere nan yon plat Petri ak yon mwayen agar (plan byè 10%, agar 1.5%, penisilin 1000 U / ml). Plak yo te enkubate nan fè nwa a nan 24 ° C.
Yo te itilize yon mikwoskòp limyè Leica DM2500 ak yon kamera dijital ICC50 HD ak yon mikwoskòp binokilè Leica M80 ak yon kamera dijital IC80HD (Leica Microsystems, Almay) pou foto, evalye gwosè ak mòfoloji nan espò ak ògàn spor.
Pou izole ADN, miselyom chanpiyon an te grandi nan mwayen pwa likid, lè sa a nan frizè nan nitwojèn likid, omojeneize, enkubate nan tanpon CTAB, pirifye ak klowofòm, epi lave de fwa avèk 2% alkòl.
Metòd ekstraksyon ADN la dekri an detay nan atik pa Kutuzova et al. (2017).
Pou detèmine espès yo pa metòd molekilè epi konpare ak lòt tansyon I. crassa li te ye, PCR te fèt ak primè ki pèmèt anplifikasyon rejyon ADN espès-espesifik: ITS1-5,8S-ITS2 (prime ITS5 / ITS4, White et al., 1990), rejyon jèn b-tubulin (Bt2a / Bt2b, Glass, Donaldson, 1995) ak tradiksyon faktè pwolonjman 1α (tef1α) (prime EF1-728F / EF1-986R, Carbone ak Kohn, 1999). Amplicons nan longè a vle yo te ekstrè soti nan jèl la lè l sèvi avèk twous la Evrogen CleanUp. Rejyon yo anplifye yo te sekans lè l sèvi avèk BigDye® Terminator v3.1 Twous sekans sik la (Applied Biosystems, CA, USA) sou yon Applied Biosystems 3730 xl sekwens otomatik (Applied Biosystems, CA, USA) Sekans nikleyotid yo te jwenn yo te itilize pou fè rechèch pou yon match nan baz done GenBank nan Sant Nasyonal Ameriken pou Enfòmasyon Biyoteknoloji (NCBI). Analiz filojenetik te fèt lè l sèvi avèk pwogram MEGA 6 (Tamura et al., 2013).
Detèminasyon nan virulans te pote soti sou fwi antye vèt nan gwo-frwi tomat (varyete Dubrava) ak tubèrkul pòmdetè (varyete Gala). Anplis de sa, simulation domaj nan fwi ak tubèrkul domaje, nou itilize tranch nan fwi yo menm ak tubèrkul. Tranch tubèrkul yo te mete nan chanm imid, ki te asyèt Petri ak papye filtre mouye nan pati anba a. Yon glise te mete sou papye a, ki te sou, nan vire, tranch tubèrkul oswa fwi yo te mete. Tout tubèrkul ak fwi yo te mete tou nan resipyan ak papye filtre mouye nan pati anba a. Nan sant la nan tranch la (oswa sou sifas la entak nan tubèrkul la oswa fwi), yo te mete yon moso nan aga (5 × 5 mm) ak chanpiyon ifa apre 5 jou nan ap grandi sou plan agar.
Evalyasyon nan rezistans nan tansyon chanpiyon fonjisid te pote soti nan kondisyon laboratwa sou agar mwayen eleman nitritif. Nou etidye sansibilite nan dwòg fonjisid Maxim, KS (aktif engredyan fludioxonil, 25 g / l), Quadris, KS (azoxystrobin 250 g / l), Scor, EC (difenokonazòl 250 g / l) (katalòg Eta ..., 2020 ). Evalyasyon te pote soti nan asyèt Petri sou medyòm-agar mwayen ak adisyon nan dwòg yo envestige nan konsantrasyon nan sibstans aktif la 0.1; yon sèl; 1 ppm (mg / L) (pou fludioxonil ak difenokonazòl), 10; dis; 1 ppm (pou azoxystrobin) ak nan medya san fonjisid (kontwòl). Te fonjisid la ajoute nan mwayen an fonn refwadi a 10 ° C, apre yo fin ki te mwayen an vide nan asyèt Petri. Yon blòk agar ak miselyom chanpiyon te mete nan sant la nan yon plat Petri ak kiltive nan yon tanperati ki nan 100 ° C nan fè nwa a. Apre 60 jou enkubasyon, dyamèt koloni yo te mezire nan de direksyon mityèlman pèpandikilè; rezilta yo mezi pou chak koloni yo te mwayèn. Eksperyans yo te fèt nan triplikat. Ki baze sou rezilta yo nan analiz yo, EC24 a te kalkile, egal a konsantrasyon nan fonjisid la, ki mwatye pousantaj la nan kwasans radial nan koloni an relatif nan kontwòl la fonjisid.
Rezilta ak diskisyon
Sou asyèt Petri ak agar plan, chanpiyon an te fòme koloni ak miselyom blan flokulan. Mwayen ki anba miselyom la te vin wouj-mawon. Lè mwayen an sèch, chanpiyon an te fòme espò de kalite sou konidyofò sèl ak total nan ti sporodochia. Macroconidia yo long, silendrik, ak youn a twa septa, mwayèn longè 27.2 µm ak yon seri de valè soti nan 23.2 a 32.2 µm, lajè - jiska 4.9 µm (figi 1). Longè an mwayèn nan mikrokonidya se 14.3 µm ak yon seri de valè soti nan 10.3 18.1 µm, lajè a se jiska 4.0 µm. Tout karaktè macro- ak mikromorfolojik anfòm nan seri varyasyon espès Ilyonectria crassa (Cabral et al., 2012).
Sekans rejyon ADN espès-espesifik yo (ITS, b-tubulin, TEF 1α) konplètman kowenside ak sekans yo nan tansyon yo I. crassa nou etidye pi bonè (Chudinova et al., 2019, Tablo 1). Pou etidye prévalence de I. crassa nan lòt rejyon yo ak analize spectre nan kilti ki afekte yo, sekans ADN analòg nan baz done GenBank yo te analize (Table 1). Sipèpoze a te 86 a 100%. Sekans yo nan tout twa rejyon ADN nan "pòmdetè" I. souch la crassa yo te idantik ak sekans yo nan tansyon yo izole nan anpoul la yon bèl ti flè ak rasin narcissus nan Netherlands ak nan rasin lan jinsang nan Kanada. Nou pa t 'kapab jwenn lòt tansyon I. crassa ak twa analize sekans analòg nan baz done louvri. Sepandan, analiz de depoze ITS yo ak sekans b-tubulin te montre prezans I. crassa sou fèy Tilip nan UK a. Chanpiyon ak yon sekans menm jan ITS yo te idantifye nan analiz mikobyota rasin aspen nan Kanada ak rasin Beech nan peyi Itali, tubèrkul pòmdetè nan Arabi Saoudit (Tablo 1). Rezilta etid sa a montre ke I. crassa gen yon distribisyon mondyal e li kapab enfekte plizyè espès plant.
Lè w ap detèmine patojènite a sou tranch tomat ak pòmdetè nan 5yèm jou a, dyamèt blesi a te rive nan 1.5 cm. Souch envestige a pa enfekte fwi tomat antye ak tubèrkul pòmdetè entak. Sepandan, sepal yo te afekte sou tomat la. Pou eskli posibilite pou kontaminasyon, yon izole chanpiyon soti nan miselyom la devlope sou yon tranch tubèrkul pòmdetè te izole nan yon kilti pi. Li te konplètman ki idantik ak souch paran an. Aparamman, I. crassa se yon parazit blesi.
Pre-plante tretman nan tubèrkul grenn ak fonjisid diminye devlopman nan maladi sou plant pandan sezon an ap grandi. Pou seleksyon fonjisid efikas, li enpòtan pou evalye kilès ladan yo ki efikas kont I. сrassa. Travay la etidye sibstans ki sou toupatou aktif nan fonjisid - fludioxonil, azoxystrobin, difenokonazòl. Fludioxonil enkli nan plizyè melanj yo itilize pou abiye grenn ak tubèrkul grenn anvan plante. Fludioxonil (Maxim) se tou itilize nan trete tubèrkul grenn anvan depo. Difenokonazòl ak azoksistrobin yo enkli tou nan yon kantite preparasyon yo itilize pou trete materyèl grenn, osi byen ke nan preparasyon ki fèt pou trete plant vejetatif (katalòg Eta ..., 2020).
To kwasans lan nan I. crassa te etidye sou medya (figi 2) ak konsantrasyon diferan nan engredyan aktif: fludioxonil (EC50 = 0.4 ppm), azoxystrobin (EC50 = 4 ppm), ak difenokonazòl (EC50 = 7.4 ppm) (Table 2 ). Preparasyon sa yo ka konsidere kòm trè efikas kont I. crassa, depi EC50 yo siyifikativman pi ba pase konsantrasyon rekòmande nan preparasyon an nan likid k ap travay yo itilize pou trete tubèrkul yo. Dapre Katalòg Eta a ... (2020), konsantrasyon fludioxonil nan likid pou trete tubèrkul pòmdetè se soti nan 500 a 1000 ppm, azoxystrobin (nan likid la pou trete anba a nan siyon an) - 3750-9375 ppm, difenokonazòl (nan likid la pou trete plant vejetatif) - 187.5-625 ppm.
Tablo 1. Resanblans nan sekans nan espès-espesifik sekans nan souch 18KSuPT2 ak tansyon nan Ilyonectria crassa ki disponib nan baz done a Genbank
Souch | Plant lame, sit nan eskresyon | Nimewo Sekans depoze nan GenBank, pousantaj resanblans | Link | ||
LI | β-tubulin | TEF 1α | |||
17KSPT1 ak 18KSuPT2 | Tuber pòmdetè, rejyon Kostroma | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Chudinova et al., 2019, travay sa a |
CBS 158/31 | Rasin Narcissus, Netherlands | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Cabral et al., 2012 |
CBS 139/30 | Anpoul Lily, Netherlands | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Ginseng rasin, Kanada | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | Fèy Tulip, UK | KJ475469 100 | KJ513266 100 | ND | Denton, Denton, 2014 |
MT294410 | Aspen rasin, Kanada | MT294410 100 | ND | ND | Ramsfield et al., 2020 |
ER1937 | Beech, Itali | KR019363 99.65 | ND | ND | Tizzani, Haegi, Motta. Soumèt dirèk |
KAUF19 | Pòmdetè tubèrkul, Arabi Saoudit | HE649390 98.3 | ND | ND | Gashgari, Gherbawy, 2013 |
ND = pa depoze
Tablo 2. Rezistans Ilyonectria crassa a fonjisid
(sibstans aktif) | EC50, ppm | ||||
3 jou | 5 jou | 7 jou | |||
Kontwole | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris, KS (fsoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Maxim, KS (fludioxonil) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Skor, EC (difenokonazòl) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
Nan travay nou an, I. tansyon crassa yo te izole nan tubèrkul pòmdetè nan rejyon Kostroma ak Moskou (Chudinova et al., 2019). Yon gwo pwopòsyon nan tansyon chanpiyon ak sekans ITS ki idantik ak I. crassa te revele lè yo analize mikobiota nan tubèrkul pòmdetè nan Arabi Saoudit (Gashgari ak Gherbawy, 2013). Aparamman, I. crassa se pa tankou ra sou pòmdetè jan li ta ka sanble. Eksperyans nou yo te montre ke chanpiyon an te kapab enfekte fwi tomat domaje. Li konnen nan literati a ke I. crassa se kapab devlope nan tè a saprotwofik (Moll et al., 2016), menm jan tou ki afekte yon varyete de plant, menm taksonomikman byen lwen tankou jonkiy, flè raje, jinsang, Aspen, ak Beech (Table 1). yon sèl). Aparamman, anpil plant sovaj ak jaden ka rezèv nan I. crassa. Pi wo a montre ke lè w ap devlope mezi pwoteksyon, li nesesè pran an kont posibilite pou afekte tubèrkul pòmdetè ak chanpiyon sa a. Preparasyon toupatou pou tretman tubèrkul pòmdetè ki gen fludioxonil, azoxystrobin, ak difenokonazòl yo te montre efikasite fonjisid segondè kont I. crassa.
Travay sa a te sipòte pa Fondasyon Ris la pou Rechèch Debaz (Grant No 20-016-00139).
Atik la te pibliye nan jounal "Plant Protection Bulletin", 2020, 103 (3)